品名：Himedia維生素B12測定培養基

英文：Vitamin B12 Assay Medium

貨號：M036

品牌：HiMedia

用途：維生素B12的微生物法測定

原理　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

乳酸桿菌生長(cháng)需要特別的營(yíng)養，因而在非選擇性培養基上很難生長(cháng)。維生素測定用培養基用于維生素的微生物法測定。該方法需要三種培養基：即維持培養基，用于保持菌種活力；接種培養基，用于測試菌液的制備；測定用培養基，用于待測維生素的定量。

HiMedia維生素B12測定培養基，不含維生素B12，但包含所有其他維生素和必要養分，用于萊士曼乳酸桿菌（ATCC 7830）的生長(cháng)。萊士曼乳酸桿菌（ATCC7830）作為測定用菌，最早由Capp等人描述（1）并被美國藥典和美國分析化學(xué)家協(xié)會(huì )（AOAC）所推薦（2，3）。

用已知稀釋度的維生素B12標準品，可以制備標準曲線(xiàn)（2，3）。

測試菌液的制備是將將活化后的菌株接種到乳酸桿菌肉湯培養基中，推薦在37°C 孵育24 小時(shí)，再離心、清洗、重懸于10 ml 生理鹽水中，再通過(guò)濁度分析或酸度分析，確定生長(cháng)反應。用維生素B12的濃度及對應的吸光度制作標準曲線(xiàn)。用標準曲線(xiàn)可確定待測樣本中的維生素B12的濃度。

應非常小心地避免培養基和玻璃器具的污染。應使用潔凈的無(wú)去污劑的玻璃器具。少量的外源物質(zhì)的污染可能導致錯誤的結果。用于接種的測定菌應在專(zhuān)用的培養基中培養。

應用　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　　 　　　 　

HiMedia維生素B12測定培養基推薦采用萊士曼氏乳酸桿菌（ATCC 7830）作為測定用菌，進(jìn)行維生素B12的微生物法測定。

質(zhì)量控制　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　  　

?   外觀(guān)——奶油色至黃色，具均勻性，傾向形成可容易分解成粉末狀的軟塊

?   制備好的培養基顏色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有輕微沉淀

?   配比濃度——在25°C下8.5%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值為6.1±0.2

?   pH值——5.90-6.30

配置　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

稱(chēng)取8.45g干粉培養基溶于100ml蒸餾水，必要時(shí)加熱使培養基溶解?；靹?，使輕微的沉淀均勻分布。測定時(shí)，分裝試管，每管為5ml培養基（包含標準品和待測樣品）。加蒸餾水，使總體積達到10ml。高壓消毒15磅121°C 5分鐘。立即冷卻培養基。每個(gè)試管(10 ml)的維生素B12水平為0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 ng時(shí)，均可獲得滿(mǎn)意結果。

培養反應　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

進(jìn)行微生物法測定維生素B12。采用萊士曼氏乳酸桿菌（ATCC7830），35-37°C孵育18-24小時(shí)。

生長(cháng)狀況　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

隨著(zhù)測定管標準品水平升高，（美國藥典維生素B12標準水平，0，0.025，0.050，0.075，0.1，0.125，0.150，0.2ng)，目標菌生長(cháng)逐漸遞增，伴隨著(zhù)620nm處吸光度的增加。